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卡那霉素用来筛选转化体  

2018-03-13 09:30:04|  分类: 教学疑难 |  标签: |举报 |字号 订阅

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卡那霉素是目前植物基因工程中被广泛应用的选择标记。选择标记的功能是在选择压力下把转化体选择出来。为达到这一目的,首先要在选择培养基或选择溶液中加入筛选剂,产生一种选择压力,使未转化细胞不能生长;其次是选择标记基因的产物对筛选剂产生抗性使转化细胞不受筛选剂的影响,能正常生长、发育、分化,从而把转化体筛选出来。
原理:
卡那霉素能对转基因植物进行筛选实质上是通过卡那霉素抗性基因起作用的。卡那霉素抗性(Kanr ) 基因即新霉素磷酸转移酶基因( npt2Ⅱ) ,亦可称为氨基糖苷磷酸转移酶Ⅱ基因( aph 2Ⅱ) ,它来自大肠杆菌( E. coli ) 的aphA2 基因。是目前在植物基因转化中应用最广泛的选择标记基因。它编码的产物氨基糖苷磷酸转移酶(APH(3′) Ⅱ—酶) 能对氨基糖苷类抗生素———卡那霉素具有抗性[3] 。此酶最早是从细菌转座子Tn5 中分离得到的,它的作用原理是:npt2Ⅱ基因产物通过酶促磷酸化使氨基糖苷类抗生素失效,从而解除毒性。因为卡那霉素能干扰一般植物细胞叶绿体及线粒体的蛋白质合成,引起植物绿色器官的黄化,最终导致植物细胞的死亡。而转基因植物由于含有卡那霉素抗性( npt2Ⅱ) 基因而抑制了卡那霉素的作用,所以通过卡那霉素,转化体就很
容易从非转化体中筛选出来。
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